端粒酶活性

端粒酶活性介绍

端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构,由一富含鸟嘌呤的重复DNA序列及其相关蛋白组成.端粒是保护染色体末端稳定必不可少的结构.端粒长度的维持需要端粒酶活性的存在.永生细胞和肿瘤细胞能够长期生存,端粒酶起到了重要的作用.端粒酶是由RNA和蛋白体组成的复合体,属一种专一的依赖RNA的逆转录酶,能以自身的RNA为模板,从头合成染色体末端的端粒DNA,弥补细胞分裂时端粒DNA的丢失,维持端粒的长度,保持染色体的动态平衡,使细胞获得永生化.自1994年Kim建立了高敏感度的、以PCR为基础的检测端粒酶的... 查阅更多↓

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端粒酶活性正常值

阴性.

检查过程

基因组DNA为0.1μg;缓冲液含50mmol/L氯化钾,10mmol/L Tris-HCl(pH8.4),1.5mmol/L氯化镁,100μg明胶;每一引物为0.25μmol/L;dATP,dCTP,dGTP,dTIP各为200μmol/L;DNA聚合酶为2.5U,终体积为100μl.加数滴液体石蜡防止蒸发. 反应周期:①变性:90℃ 30～60s;②引物和模板的退火温度:40～60℃ 30～60s;③延伸:72℃ 1～2min.经反复循环30～40次,最后1次72℃引物延伸7min后终止.除去液体石蜡后,产物可供分析.经琼脂糖凝胶电泳后,用溴乙锭染色,经紫外灯照射可见预料扩增长度的荧光条带.产物也可与放射标记或非放射标记的寡聚核苷酸探针行Southern印迹杂交或点渍印迹杂交.如用PCR自动仪则更为方便,将反应试剂、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入试管后,放进已调好程序,即所需变性→退火→延伸各自的温度和时间及循环次数的自动仪中进行反应,即可获得满意的扩增产物.

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