精子顶体酶活性

取0.25ml液化的精液于塑料离心管中,以500×g离心5min;弃上清,将离心管在吸水纸上倒置,以除去剩余溶液,再加0.25ml 2%的醋酸溶液,放4℃冰箱内抽提过夜(16～24h),取出后以1000×g离心10min,取上清备用,在比色杯内依次加入用pH8.7 0.05mol/L Tris-HCl缓冲液新鲜配制的NAD(1mg/ml)0.1ml,BAEE1mg/ml 0.5ml,ADH(3.46mg/ml)0.1ml和Tris-HCl缓冲液2.25ml,均匀混合后25℃下预温5min,再加入0.05ml顶体酶抽提液立即混合均匀,记录加入酶液后10min,反应液在366nm下吸光度的变化值.