PHA淋巴细胞转化试验

计数淋巴细胞200个,识别淋巴母细胞(超过正常淋巴细胞2～4倍,核膜清晰,核染质疏松而成细网状,核仁明显,胞浆丰富,呈嗜碱性)、过渡型淋巴细胞(体积变化不大,仅为上述明显核变化)、小淋巴细胞(体积稍大于红细胞,核染质致密,无核仁),统计其转化率.皮肤科转化率正常值大于58%.

操作方法: 1.取无菌肝素抗凝血0.lml,加入1.8ml细胞培养液中,同时加入1 000μg/m1 PHA 0.1m1,对照管不加PHA,将细胞置37℃、5%CO2培养3d,每天摇动1次. 2.培养结束时吸弃大部分上清液,加入8.5g/L NH4Cl 4ml混匀,置37℃水浴10min. 3.2500r/min离心10min,弃上清液,沉淀加5ml固定液,室温作用5min. 4.2500r/min离心10min,弃上清液,留0.2ml沉淀细胞制片,迅速吹干. 5.吉姆萨染液染色 10～20min,水洗,干燥. 6.油镜计数200个淋巴细胞中转化的细胞数,计算转化率. 结果判断: 1.淋巴母细胞的形态学标准 细胞核的大小、核与胞浆的比例、胞浆染色性及核的构造与核仁的有无. ⑴成熟的小淋巴细胞:与未经培养的小淋巴细胞大小一样,为6～8μm,核染色致密,无核仁,核与胞浆比例大,胞浆染色为轻度嗜碱性. ⑵过渡型淋巴细胞:比小淋巴细胞大,约10～20μm,核染色致密,但出现核仁,此为与成熟小淋巴细胞鉴别要点. ⑶淋巴母细胞:细胞体积增大,约20～30μm,形态不整齐,常有小突出,核变大,核质染色疏松,有核仁1～2个,胞浆变宽,常出现胞浆空泡. ⑷其它细胞:如中性粒细胞在培养72h后,绝大部分衰变或死亡呈碎片. 2.淋巴细胞转化率的计算 按上述分类检查推片头、体、尾三部分,计数200个淋巴细胞,算出百分率.转化的淋巴细胞包括淋巴母细胞和过渡型淋巴细胞,未转化的淋巴细胞指的是成熟的小淋巴细胞.在正常情况下,PHA诱导的淋巴细胞转化率为60～80%,如为50～60%则偏低,50%以下则为降低. 再根据结果得出正确的判断.