补体结合试验

0～1∶10

血素的滴定: ①取补体1ml,加BBS 9ml,依次稀释成1∶20,1∶30,1∶40,1∶50,1∶60,1∶80,1∶100,1∶200,1∶400,同时取50%的溶血素0.2ml,加BBS 9.8ml,即为1∶100的溶血素,然后继续稀释成1∶800,1∶1600,1∶3200,1∶6400. ②采取方阵排列试管,纵行各管加不同浓度的补体0.1ml,横排各管加溶血素0.1ml(皆应从最高稀释度加起)混匀后,各管加BBS 0.2ml,补体和溶血素对照管各加BBS 0.3ml,最后在各管中加2%羊红细胞0.1ml.各管总量为0.5ml,摇匀,放37℃水箱中30min,观察结果. 以完全溶血的补体和溶血素最高稀释度为各自的单位.在实际应用时,溶血素用2U(3200÷2=1600),补体用2.5U(80÷2.5=32). (2)正式试验: ①用V型微量反应板操作,每份标本作一个试验孔.一个血清对照孔.各孔内先加BBS 0.025ml.②用稀释棒蘸取血清(0.025ml)加入第一孔,旋转后移入第二孔,共八孔,如此可得1∶2～1∶256稀释. 以小量法测定抗体的补体结合试验为例.逐步加入各种试剂,温育后先观察各类对照管,应与预期的结果吻合.阴性、阳性对照管中应分别为明确的溶血与不溶血;抗体或抗原对照管、待检血清对照管、阳性和阴性对照的对照管都应完全溶血.绵羊红细胞对照管不应出现自发性溶血.补体对照管应呈现2U为全溶,1U为全溶略带有少许红细胞,0.5U应不溶.如0.5U补体对照出现全溶表明补体用量过多;如2U对照管不出现溶血,说明补体用量不够,对结果都有影响,应重复进行试验.补体结合试验结果,受检血清不溶血为阳性,溶血为阴性.