细菌的鉴定

胃肠道的正常菌群可分为需 氧菌、兼性厌氧菌和厌氧菌.最居优势的是厌氧菌,占菌群总数的99%,其中仅类杆菌和双歧杆菌就占90%,而乳杆菌和双歧杆菌可与我们终生相随.这些正常菌群的种类以及比例均正常.

一. 吲哚试验方法:以接种环接种待试细菌的新鲜斜面培养物于邓亨氏蛋白胨溶液中, 37℃培养24～48小时后(可延长4～5天).于培养液中加入戊醇或二甲苯2～3ml,摇匀,静置片刻后,沿试管壁加入试剂2毫升.在戊醇或二甲苯下面的液体变红色者为阳性反应. 也可将一指头大的脱脂棉,滴上两滴欧立希氏试剂,再在同处加滴两滴高硫酸钾(K2S2O4)饱和水溶液,置于含培养液的被检试管中,离液面约半寸,置烧杯内水浴煮沸为止,脱脂棉上出现红色为阳性.此法略繁,但省试剂且准确,因为将试剂加到液体中,吲哚和粪臭素均呈阳性,而用此法,只是吲哚(它能挥发)呈阳性反应. 亦可以滤纸片浸湿1%的二甲基苯丙烯甲醛的10%浓HCl溶液,然后以接种环刮取一环琼脂的纯培养物涂布于该滤纸上. 细菌涂印周围呈蓝色者为阳性,细菌涂印周围无色泽变化或淡黄色者为阴性. 二. 淀粉的水解淀粉在酸的催化作用下,能发生水解;淀粉的水解过程:先生成分子量较小的糊精(淀粉不完全水解的产物),糊精继续水解生成麦芽糖,最终水解产物是葡萄糖. 对剂:碘化钾 2g 蒸馏水培养基:将细菌接种在平板上,置37度温箱中培养24h,加革兰氏碘液于菌落上,观察颜色变化,呈蓝色者为阴性,无蓝色为阳性. 三. β-半乳糖苷酶试验试剂:0.75M ONPG溶液:取80mg溶于15ml蒸馏水中,在加入缓冲液(6.9g NaH2P04溶于45ml蒸馏水中,用30% NaOH调整pH为7.0,再加水至50ml)5ml,置4℃冰箱中保存. 方法:取纯菌落用无菌生理盐水制成浓的菌悬液,加入0.25ml ONPG液,置35℃水浴20min至3h,观察结果. 结果判定:通常在20～30min内显色.出现黄色为阳性反应.