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HPLC法天冬氨酸(AsparticAcid,Asp)1.6±1.7μmol/L;谷氨酸(GlutamicAcid,Glu)4.6±1.2μmol/L;丝氨酸(Serine,Ser)33.9±4.9μmol/L;组氨酸(Histidine,His)10.0±2.7μmol/L;甘氨酸(Glycine,Gly)8.6±2.1μmol/L;苏氨酸(Threomine,Thr)32.4±12.6μmol/L;精氨酸(Arginine,Arg)35.5±6.1μmol/L;丙氨酸(Alanine,Ala...
(1)脱盐:取已过滤的脑脊液10ml加入装有5ml Dowex-50×8离子交换树脂的层析柱内,用100ml蒸馏水淋洗层析柱,流出液弃去.用2mol/L氨水30ml洗脱氨基酸.洗脱液在40℃真空蒸发,残渣溶于1ml蒸馏水中. 脑脊液用1ml,先经磺基水杨酸40mg去蛋白,离心后取上清液0.5ml加入装有1ml Dowex 50×8的层析柱内,用40ml蒸馏水淋洗层析柱,流出液弃去.用2mol/L氨水15ml洗脱氨基酸.洗脱液在40℃真空蒸发,残渣溶于0.05ml蒸馏水. (2)点样:在薄层层析板的左下角距二边1.5cm处,点加脑脊液的脱盐浓缩液4μl;点样量以2μg氨基氮为度,且直径愈小愈好. (3)氧化含硫氨基酸:在点样处加0.5μl含钼酸铵的H2O2,在室温放置30min. (4)展层:先将薄层层析板置于盛有第一向溶剂的层析缸中,展层约60min,即溶剂上升至9.5cm处时取出,再在40℃气流中吹30min.将薄层层析板转90℃再放入盛有第二向溶剂的层析缸中展层约100min,即溶剂上升至9.5cm处时取出在40℃放过夜. (5)向薄层层析板喷洒茚三酮试剂,再置100℃烘箱30min,观察氨基酸的紫蓝色斑点,脯氨酸斑点为黄色.