血清钙

(1)甲基百里香酚蓝比色法(MTB): ①MTB与EDTA有相似的氨羧结构,能螯合多种阳离子,但络合稳定常数不同. ②加入:EDTA的作用,目的在于掩蔽试剂中污染的钙以及其他的金属离子.能降低空白管吸光度,提高测定管吸光度,从而使方法灵敏度提高. ③EDTA的用量选择,绝大部分金属离子与EDTA的络合稳定常数大于钙,小于钙的仅是少数微量元素.限量的EDTA仅能掩蔽试剂中的干扰元素,没有多余的EDTA络合血清钙,一般加入配试剂中的浓度EDTA99～108μmol/L,最终络合显色反应的EDTA浓度50～54μmol/L. ④所用的试管清洗后用去离子水浸泡两次,再烤干备用.清洁管加入试剂后应显一致的浅灰绿色,若显蓝色则试管表示有钙污染. (2)邻甲酚酞络合酮直接比色法: ①本测定用血清或肝素抗凝血浆标本.不能用钙螯合剂(EDTA-Na2)及草酸盐作抗凝剂的标本. ②邻甲酚酞是一种酸碱指示剂,在结构上与甲基百里香酚蓝相似,在中性或酸性环境中无色,仅在碱性溶液中和钙离子络合呈紫红色.所以pH对显色有很大的影响,在pH10.5～12时,此反应敏感性最好,故用pH11为宜. ③试剂中加入8-羟基喹啉消除镁的干扰,能特异地络合镁,TritonX-100具有消化蛋白的影响.有的作者,在试剂中还加入氰化物掩蔽其他金属离子;二甲亚砜消除蛋白影响及抑制邻甲酚酞络合物的解离,从而降低空白液的吸光度;聚乙烯吡咯烷酮亦能消除蛋白质、胆红质及磷的干扰. ④用来作血清钙测定的碱性缓冲液较多,可根据条件选用,常用的有乙二胺-氰化钾、乙二胺-醋酸钾-盐酸、乙二胺-乙二醇、乙醇胺-硼酸、2-氨基-2-甲基-1-丙醇等.用乙二胺-乙二醇缓冲液测定呈色稳定.乙醇胺-硼酸缓冲容量较大,并能使空白试剂的吸光度保持较低读数.2-氨基-2-甲基-1-丙醇无毒,无刺激性,也能使空白管有较低的读数. ⑤显色剂有时略有结晶析出,是8-羟基喹啉在水中溶解度很低,易析出结晶所致,这时可取上清液应用. (3)乙二胺四乙酸二钠滴定法 ①测定标本若有黄疸或溶血时,终点不易观察,则必须将标本进行处理,首先用草酸盐将钙沉淀,再用盐酸及柠檬酸钠重溶. A.尚需增加几种试剂:0.7mol/L草酸铵;0.05mol/L柠檬酸钠;1mol/L盐酸. B.按下法操作:吸取血清0.1ml,置于离心管中,加去离子水0.25ml、0.7mol/L草酸