弓形虫病检查

㈠病原检查

1.直接镜检:取患者血液,骨髓或脑脊液,胸腹水,痰液,支气管肺泡灌洗液,眼房水,羊水等作涂片,或淋巴结,肌肉,肝,胎盘等活组织切片,作瑞氏或姬氏染色镜检可找到滋养体或包囊,但阳性率不高,亦可作直接免疫荧光法检查组织内弓形虫.

2.动物接种或组织培养:取待检体液或组织悬液,接种小白鼠腹腔内,可产生感染并找到病原体,第一代接种阴性时,应盲目传代3次,或作组织(猴肾或猪肾细胞)培养以分离,鉴定弓形虫.

3.DNA杂交技术:国内学者首次应用32P标记含弓形虫特异DNA序列的探针,与患者外周血内细胞或组织DNA进行分子杂交,显示特异性杂交条带或斑点为阳性反应,特异性和敏感性均高,此外,国内亦已建立多聚酶链反应诊断本病,并与探针杂交,动物接种和免疫学检查方法相比较,显示春具高度特异,敏感和快速等优点.

㈡免疫学检查

1.检测抗体:所用抗原主要有速殖子可溶性抗原(胞质抗原)和胞膜抗原,前者的抗体出现较早(用染色试验,间接免疫荧光试验检测),而后者的抗体出现较晚(用间接血凝试验等检测),同时采用多种方法检测可起互补作用而提高检出率,由于弓形虫在人体细胞内可长期存在,故检测抗体一般难以区别现症感染或以往感染,可根据抗体滴度的高低以及其动力学变化加以判断,常用的检测方法有:

⑴染色试验(Sabin-Feldman DT):检测IgG抗体,感染后1～2周出现阳性,3～5周抗体效价达高峰,以后逐渐下降,可维持多年,抗体效价1∶阳性提示为隐性感染;1∶256为活动性感染1∶1024为急性感染,其缺点为需要活虫进行操作.

⑵间接荧光抗体试验(IFAT):检测IgM和IgG抗体,具灵敏,特异,快速,重复性好等优点,与DT基本一致,但如有类风湿因子,抗核抗体阳性时,可引起假阳性反应,血清抗体效价1∶64为既往感染,余同DT.

⑶间接血凝试验(IHA):试验方法简便,与DT结果符合率高,但一般在病后一个月左右出现阳性,结果判断同IFAT,重复性差和致敏红细胞不稳定与其缺点.

⑷酶联免疫吸附试验(ELISA):可检查IgM与IgG抗体,并有灵每度高,特异性强等优点,也可用于抗原鉴定,近年来在ELISA的基础上又创建,衍生了多种新新的测定方法,如金葡萄A蛋白(SPA)-ELISA;辣根过氧化物酶标记SPA取代酶标第二抗体进行ELISA检测(PPA-ELISA);亲和素-生物素(ABG)ELISA;凝胶扩散(DIG)-ELISA;斑点(DDT)-ELISA以及单克隆抗体(McAb)-ELISA等更灵敏,更特异的方法.

⑸放射免疫试验(RIA):具有高度敏感性和特异性.

2.检测抗原

系用免疫学方法检测宿主细胞内的病原(速殖子或包囊),在血清及体液中的代谢或裂解产物(循环抗原),是早期诊断和确诊的可靠方法,国内外学者建立了McAb-ELISA以及McAb与多抗的夹心型ELISA法检测急性患者血清循环抗原,其敏感度为能检出血清中0.4μg/ml的抗原.

㈢皮内试验

以受染小白鼠腹腔液或鸡胚液作抗原,常出现延迟性,结核菌素反应,可用作流行病学调查,目前应用不多.