胰岛素抗体

阴性。

(1)酶联免疫吸附法

将胰岛素-卵清蛋白用包被液稀释至20μg/ml，包被聚苯乙烯反应板微孔，每孔100μl，4℃过夜。洗涤液洗3次，每次3min，用pH7.4，0.01mol/L PBS(内含15%小牛血清)封闭，43℃ 1h。同上法洗后加待测血清(1∶100)或阴性、阳性对照，每孔100μl，43℃ 1h(37℃ 2h)。同上法洗后加最适稀释度的HRP-SPA，每孔100μl，45℃ 1h(37℃ 2h)。同上法洗后加底物(OPD-H2O2)溶液，每孔100μl，37℃ 10min显色。用2mol/L H4SO4终止反应。

酶联免疫检测仪检测492nm波长吸光度值。

(2)免疫酶斑点法

将NC膜划成5mm×5mm的小方格，浸于pH7.4，0.01mol/L PBS中30min，滤纸吸干。取2μl胰岛素-卵清蛋白交联物点样于小方格中央，室温自然干燥。用pH7.4，0.01mol/L PBS(内含卵清蛋白10.0g/L)封闭，45℃ 1h，滤纸吸干。加待测血清2μl于抗原包被处，45℃ 30min后，用pH7.4，0.01mol/L PBS洗3次，每次3min，滤纸吸干。将膜置于最适浓度HRP-SPA中，45℃ 30min，同上法洗后滤纸吸干。浸于新配底物中5～10min，显色后流水冲洗，终止反应。