糖化血清蛋白

1.9±0.25mmol/L.

测定管加待检血清(血浆)0.1ml，空白管加蒸馏水0.1ml，各加37℃预温的NBT试剂4m1，混匀，置37℃准确水浴15min取出，流水冷却(低于25℃)。冷却后15min内于分光光度计波长550nm，10mm光径比色杯以空白调零，读取测定管吸光度。从标准曲线查得结果。以果糖胺mmol/L报告。 附注: (1)DMF可以自己合成，方法是称取无水D-葡萄糖90g，吗啡啉58g，加蒸馏水1L，溶解后在60～70℃水浴上搅拌，开始为黄色糊状物，后颜色逐渐加深。20min后，移去水浴，缓慢地加入丙二酸18g，整个加入过程需在10min以上。再置水浴并使温度上升至80℃，不断搅拌，颜色由黄绿色转变为琥珀色。10min后，加无水乙醇70ml，维持75℃30min，再加入丙酮70ml。此时可见到结晶析出，此即为DMF。放4℃冰箱过夜。收集结晶，并用无水乙醇重结晶3次，使产物脱色纯化，干燥备用。熔点146～147℃，分子式C10H19O6N，分子量249D。 (2)pH值、反应温度、反应时间对本试验影响较大，必须严格控制。 (3)血清蛋白经非酶促糖化反应可形成酮胺结构。DMF在适当的pH值及温度条件下，经过结构重排也可以由氧环式结构形成1-脱氧-1-氨基-2-酮基的酮胺结构。因此用它作为标准参照物是合理的。 (4)用定值冻干糖化血清蛋白作标准，测定结果更稳定。因为用不同标准物时所测得结果不完全一致，最好建立实验室的参考值。