纤维蛋白肽A

1.2±0.8μg/L.

(1)血浆标本的采集:用塑料注射器顺利取静脉血4.5ml(开始的2ml弃去),加入盛有0.5ml抗凝剂(肝素钠500u和aprotinin 5000u)的试管中,立即混匀.3000r/min离心20min,分离血浆,吸上层血浆至另一试管,立即作下一步处理或置-20℃保存. (2)血浆标本的皂土吸附处理:目的是彻底除去纤维蛋白原.40mg皂土加入45ml的聚丙烯塑料离心管中,加入0.5ml吸附缓冲液,充分混匀,加入1ml血浆,在回旋混合器上震荡混匀,再缓慢震摇10min.5000r/min离心15min,吸取上清液至另一试管,再如上法以皂土吸附处理1次.然后吸取上清液1ml加到一预先盛有20g/LTween20溶液50μl的试管中,混匀.最终标本已稀释20倍. (3)FPA包被:取1μg/ml的FPA溶于包被缓冲液中,加入聚苯乙烯反应板,200μl/孔,加盖,37℃过夜.次日弃孔内液.以洗涤液洗板5次,每次3min,甩干,备用. (4)FPA标准品:以标本稀释缓冲液配成;25,12.5,6.25,3.12,1.56,0.78ng/ml等6个不同浓度.分别吸取0.9ml于一系列小试管中,再在各管中加入0.1ml的工作浓度的兔抗人FPA.经皂土吸附处理的待测血浆标本作原倍、1∶2、1∶4倍3个浓度如上操作.上述各管置37℃反应3h. (5)从温育后的上述各管中分别吸取200μl加入已包被的FPA的反应板各孔中,置板于37℃保温2h,洗板5次,甩干. (6)各孔加HRP-羊抗兔IgG(以标本稀释液稀释至工作浓度)200μl/孔,置板于37℃温育2h,洗板5次,甩干. (7)各孔加新鲜配制的底物液200μl,37℃避光精确反应3min,各孔立即滴加3mol/L H2SO4 50μl以终止反应.在酶标上测定各孔的A值(492nm).