血清肌红蛋白

(1)ELISA法:取一清洁干燥聚丙乙烯微孔反应板,标明空白、标准和测定,按以下步骤进行: ①空白对照孔加入200μl%正常兔血清,其余孔各加入200μl包被液(内含Mb抗体),37℃放置30min,再置4℃过夜,弃去上层液,用洗涤液洗3次,每次放室温3min. ②空白对照孔加入100μl14%正常人血清;标准孔各加入5、10、20、40、80、160、320ng/ml的标准Mb溶液(用稀释液配成)20μl,再加入4%正常人血清,测定孔加入20μl样品血清,再加入4%正常人血清8μl.每孔各加入100μl酶标Mb溶液,置37℃1h,弃去溶液,用洗涤液洗3次. ③每孔各加入200μl底物溶液,37℃15min(避光显色). ④每孔加入2mol/L H2SO4以终止反应,振荡1min,放置室温10min,以空白对照孔调零,在492nm处读取各孔吸光度. (2)RIA法: ①取10×75mm塑料试管,零标准管加20g/L BSA液0.1ml,标准管(S1～4)加标准液0.1ml,测定管加待测血清0.1ml.每管各加抗血清0.1ml,混合后放37℃,水浴中20min. ②每管各加125Ⅰ-Mb液0.1ml,混合,放37℃水浴中20min,再向各管加PR试剂0.5ml,继续放37℃水浴中30min. ③离心(3500r/min)15min.弃去上清液,在自动γ免疫计数器上测放射性. ④以B/B0%为纵坐标,相对应的标准Mb浓度为横坐标,绘制标准曲线.根据样品管的B/B0%,从标准曲线上查得样品中Mb浓度.