总胆汁酸

(1)血清中LD在其底物存在下(血清中含有一定量的乳酸)也可还原NAD+为NADH,产生高空白值.本法中加入丙酮酸钠,抑制LD活性,可有效地降低空白吸光度.

(2)反应混合物中各成分浓度为: 3α-HSD 5U/L 黄递酶 500U/L NAD+ 1mmol/L NTB 0.2g/L pH 7.50

(3)反应混合物的吸光度受蛋白质影响,故甘氨胆酸钠标准液配制于混合血清中.混合血清中原有胆汁酸及其他可能参与反应的物质需设P管消去.

(4)3α-HSD制品中含有二硫苏糖醇(di-thiothreitol,DTT),酶制剂用量过多时可影响NTB的还原.

(5)本法线性达250μmol/L.如血清胆汁酸超过此值应作适当稀释.

(6)Noigen ET-180是一种非离子表面活性剂,化学名为聚氧乙烯油醚(polyoxy-ethyleneolylether),为日本京都Dai-ichi Ko-gyo Seiyaku公司产,加入反应混合物中可防止沉淀,不影响3α-HSD及黄递酶活性,不影响本测定系统的敏感性.

(7)血清中的TBA含量较低,标本中含大量的干扰物质,其中最主要的是乳酸脱氢酶(LDH).LDH能影响NAD+的还原反应,由LDH生成的NADH往往比由3α-HSD催化TBA参与的反应生成的NADH量要大的多.由于各类肝炎均可引起血清LDH升高,因此测定中必须消除LDH的影响,方法有:血清67℃加温30min、加草酸作为LDH的封闭剂、碱或酸处理、或用丙酮酸钠抑制LDH活性等,其中以丙酮酸钠法最好.其它还原性物质的干扰通过设立双试剂,样品先和不加3α-HSD的体系孵育,使样品中的干扰物质反应,然后加入3α-HSD,使TBA反应,可排除干扰.