淋巴细胞毒试验

(1)靶细胞的接种:选用能贴壁生长的肿瘤细胞,用Hank液洗涤后经2.5g/L胰酶消化2～3min,倒去胰酶液(细胞仍贴在瓶壁),用Hank液轻洗细胞3次,倒去Hank液.用含10%～20%小牛血清的RPMI 1640液将贴壁细胞冲洗下来,用100目滤网过滤除去细胞团块,制备成1×106/ml单个肿瘤细胞悬液,用滴管吸取细胞悬液滴入40孔培养板中,每孔1滴(约含100～150个细胞),置培养板于37℃含5% CO2孵箱中20h.取出培养板甩去其中培养液,瑞氏染色后计数每10孔中平均贴壁的肿瘤细胞数,如果两组平均数相差>1/3,表明误差太大不能使用,如果误差不大其它各培养板可进行正式试验. (2)分离淋巴细胞:取受检者肝素抗凝血3ml,用聚蔗糖-泛影葡胺分层液分离淋巴细胞后再用Hank液洗3次,然后用RPMI 1640液配成(2～3)×105/ml细胞悬液. (3)细胞毒试验:淋巴细胞和靶细胞按200∶1比例混合,每孔中加入(2～3)×104个淋巴细胞(0.1ml体积中)约每孔再加入含20%小牛血清的RPMI 1640液0.1ml,置培养板于37℃ 5%CO2孵箱中40h.取出培养板甩去培养液,瑞氏染色后于显微镜下计数培养板底部残留的靶细胞数.