血清免疫球蛋白D（IgD）

(1)单向免疫扩散法:同IgG测定,但待测血清不稀释,每份检样设2个复孔,加样后于37℃扩散48h,标准曲线制备时将IgD参考品稀释为10、50、100、150及200U/ml. (2)ELISA法:按试剂盒说明书.或参考以下步骤. ①用包被稀释马抗人IgD的IgG组分(1.0μl/ml)包被反应板微孔,每孔100μl.4℃过夜后用洗涤液洗3次,每次3min(下同). ②加待测血清(用稀释液作1∶200稀释)100μl或各种浓度的IgD参考品(2.5、1.25、0.625、…、0.02U/ml),每孔100μl.均设2个复孔.37℃ 2h后洗涤. ③加最适浓度兔抗人IgD血清,每孔100μl.37℃ 2h后洗涤. ④加最适浓度的羊抗兔IgD-HRP,结合物,每孔100μl.37℃ 2h后洗涤. ⑤加底物溶液,每孔100μl,37℃ 30min.加2mol/L H2SO4 50μl终止反应,于492nm测吸光度.根据检样吸光度查标准曲线,算出相应IgD含量(U/ml).1U=1.41μg.