酶联合吸附测定

待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)

常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法,前者用于检测大分子抗原,后者用于测定特异抗体. 1.间接ELISA 本法主要用于检测抗体.间接ELISA的操作程序如下. (1) 材料 ① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液. ② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清. ③ ELISA检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板. (2) 方法步骤 ① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干. ② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干. ③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干. ④ 加底物液　→ 37℃ 30分钟,加终止液. ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值,并计算出P/N比值. 2.双抗体夹心ELISA 本法主要用于检测大分子抗原. ① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干. ② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干. ③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干. ④ 加底物液　→ 37℃ 15分钟,加终止液. ⑤ 用ELISA检测仪测定OD值.