凝集实验

1.玻片法常用于鉴定菌种及菌型,如葡萄球菌、肺炎链球菌、沙门菌属、志贺菌属、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、脑膜炎奈瑟菌等的鉴定. (1)原理:用已知的诊断血清或血浆在玻片上与待检菌及生理盐水混合,若出现肉眼可见的特异性凝集块,表示该菌为相应的细菌. (2)方法:取一洁净载玻片,用接种环取待检菌培养物,分别与诊断血清及生理盐水混匀,上下摇动玻片数次,l～3min后观察结果. (3)结果判断:阳性一待检菌明显凝集,对照菌均匀混浊.阴性一待检菌及对照菌均匀混浊.自凝一测定菌、对照菌均凝集. (4)注意事项:某些细菌菌体表面常有一层表面抗原,如伤寒沙门菌的vi抗原及志贺菌属的K抗原等.它能阻抑菌体抗原与抗血清的凝集,从而导致假阴性结果.此时应将菌悬液于100℃中煮沸1h,以破坏其表面抗原,然后再做试验. 2.试管法 此法可排除玻片法凝集试验的非特异性凝集,是一种半定量凝集试验. (1)方法:取小试管10支,第1管加入生理盐水0.45ml,再加入0.05ml诊断血清混匀,其余各管均加生理盐水0.25m|,然后从第 1管中吸出0.25ml加入第2管中,混匀后再吸出0.25ml加入第3管,依次类推至第9管,从第9管吸出0.25ml弃去,第l0管不加抗血清为对照管.每管加待检菌菌液0.25ml,充分震荡混匀后,置37℃水箱浴中4h,再置4℃中过夜. (2)结果判断:以血清最高稀释度达到()凝集者(管内液体澄清,部分凝集块沉于管底)为该菌的凝集效价.若此效价所用原诊断血清效价一半以上者为阳性. (3)注意事项:脑膜炎奈瑟菌的菌液必须经56℃30min灭活,以破坏自溶酶.若试验出现低凝集结果时,应将该菌传代数次后,再作试验.