乳糜微粒

(1)免疫透射比浊法: ①关于抗血清:比浊测定与其他方法相比对抗血清的要求更高.比浊法以用多克隆抗体为宜.抗血清中必须不含杂抗体.必须十分重视从人血清中提取的apoA-Ⅰ达到免疫纯、色谱纯与电泳纯,这不是一般实验室都能做到的.抗血清效价(滴度)不可低于16.目前国内某些商品试剂中,apoA-Ⅰ抗血清效价极低,选购试剂盒时必须注意.如果没有在选购前鉴定抗血清质量的经验,应请有条件的单位鉴定之. ②上法中标本(血清)稀释200倍是为了便于手工操作(加样100μl),如有精密加样器,可作20倍稀释(用10μl).为了适合不同实验室的条件(如不同类型的自动化仪器),作适当修改时应注意抗原抗体的比例,必须十分注意反应体系中不可有抗原过量,线性上限不可低于2.5g/L.换言之,抗血清用量必须充裕,否则标本中apoA-Ⅰ高水平时测出结果偏低.目前国内某些商品试剂盒不但抗血清效价过低,操作中所定标本用量又过大(如3～5μl),抗体明显不足,测出结果必然不准确. ③为了达到准确测定的目的,apoA-Ⅰ与B比浊测定(终点法)中必须作校准曲线计算结果.一定范围(低标本用量)浓度(X)与浊度(Y)基本上成直线关系,直线回归计算出在Y轴上有一定截距(A值<0.1),所以用单点校准计算结果偏差较大,使测出结果不能准确反映浓度的高低(高的偏低,低的偏高).千万不要因为单点法简便而忽略了测定的准确性.无论用何种自动化仪器,必须先试作校准曲线.如果在所用仪器及特定条件下反复测试,回归线的截距不明显时,才能采用单点校准法.标本用量在3～5μl时,即使加大抗血清用量,浓度与浊度也不成直线关系,只能用曲线直线化转换后计算. ④主要干扰因素是血清本身的混浊(如高脂血清),用超离心或脂肪酶水解等标本预处理方法都不实用.用表面活性剂消浊的作用也有限,所以在测定中必须作标本空白管.除了自动分析中可采用两点法外,手工法用单一试剂而不扣除标本空白的做法是错误的.为了减少基质效应对浊度反应的影响,必须用定值血清作校准物.此外,尘埃粒子、比浊皿划痕等干扰也必须排除. ⑤有的商品试剂盒(包括某些进口产品)所附校准血清定值不准确,是误差的重要来源. (2)火箭电泳法: ①抗原稀释倍数与抗血清用量的选择,应以火箭峰清晰、校准曲线斜率适中并成直线为宜.本法同时测定apoA-Ⅰ与apoB,应调整两种抗血清用量,使二者峰高有区别,a