红细胞血清总胆红素

(1)改良咖啡因(J-G)法: ①本法测定血清总胆红素,在10～37℃条件下不受温度变化的影响.呈色在2h内非常稳定. ②本法灵敏度高(摩尔吸光系数为74380±866 L?mol-1?cm-1). ③轻度溶血对本法无影响,但严重溶血时可使测定结果偏低.其原因是血红蛋白与重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素,还可被亚硝酸氧化为高铁血红蛋白而干扰吸光度测定. ④叠氮钠能破坏重氮试剂,终止偶氮反应.凡用叠氮钠作防腐剂的质控血清,可引起偶氮反应不完全,甚至不呈色. ⑤胆红素对光敏感,标准及标本均应尽量避光. ⑥脂血及色素对测定有干扰,应尽量取空腹血. ⑦标本对照管的吸光度一般很接近,若遇标本量很少时可不作标本对照管,参照其他标本对照管的吸光度. ⑧胆红素大于171μmol/L的标本可减少标本用量,或用生理盐水稀释血清后重做. ⑨结合胆红素测定,至今无候选参考方法,国内也无推荐方法.方法不同,反应时间不同,结果相差很大.时间短,非结合胆红素参与反应少,结合胆红素反应也不完全;时间长,结合胆红素反应较完全,但一部分非结合胆红素也参与反应.这是一个很难权衡的问题,在没有结合胆红素标准液的情况下,问题更复杂. Doumas参照Michaelsson及Gambino的方法,在血清中先加入50mmol/L盐酸,再加入重氮试剂,反应10min,即防止非结合胆红素反应,又使结合胆红素反应较完全. Doumas采用的方法:50mmol/L盐酸0.8ml,血清0.2ml,混匀.再加重氮试剂0.4ml,混匀,室温置10min,加入32g/L抗坏血酸0.1ml(或20g/L NaN2 0.1ml),混匀.最后依次加入碱性酒石酸钠溶液1.2ml及咖啡因试剂1.6ml.用非结合胆红素作标准液时,标准管操作顺序同J-G法总胆红素测定,但在重氮试剂反应后要加入抗坏血酸,最后也要加50mmnl/L盐酸. (2)胆红素氧化酶法: ①BOD浓度可根据所用制品在测定高胆红素血清标本或342μmol/L标准的反应速度,即能否在5min反应完全而确定,文献报道BOD在反应液中终浓度为0.18～1.14U/ml. ②在反应体系中存在足够活力的BOD前提下,反应时间均为5min(37℃),也即反应5min时△A达最大值.建议根据所用的试剂盒用高浓度的血清标本或342μmol/L标准液进行反