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(1)比色法: ①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物,但因其为水溶液,含量不够准确,且保存不当易产生酮酸类物质,抑制酶促反应.而乳酸锂为固体,稳定,易于称量. ②除二乙醇胺缓冲液外,也可用Tris或焦磷酸缓冲液,避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用,提高了阳性检出率. ③比色应在5~15min内完成,否则吸光度降低. ④结果>2500U时,可用生理盐水稀释标本后再测,其结果乘以稀释倍数. (2)连续监测法: ①标本勿溶血,当溶血达Hb 0.8g/L时,LDH活性可升高58%. ②标本于室温(25℃)保存,2天内酶活性稳定,冰箱保存酶活性降低,-20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活. ③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意,草酸盐可抑制LDH活性. ④复溶后溶液变浊或初始吸光度>0.5应弃去. ⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性,但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同,其参考区间也有差异.以乳酸和NAD为底物,在340nm监测吸光度增高速率为正向反应,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH为底物,监测340nm吸光度下降速率为逆向反应,以LD-P表示.正逆反应两法相比,LD-L法的主要优点是:A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大,前者冰箱可保存6个月以上,而后者仅几天;B.速率反应的线性范围(吸光度对监测时间t作图)较宽;C.重复性比LD-P好.由于逆向反应速度比正向反应速度快,其参考值约为LD-L的2倍.
(温馨提示:以上资料仅提供参考,具体情况请向医生详细咨询。)